CRISPR/Cas9基因敲除

CRISPR/Cas9 是进行基因编辑的强大工具，基因敲除是在目的基因的上下游各设计一条向导RNA（向导RNA1，向导RNA2），将其与含有Cas9蛋白编码基因的质粒一同转入细胞中，向导RNA通过碱基互补配对可以靶向PAM附近的目标序列，Cas9蛋白会使该基因上下游的DNA双链断裂。而生物体自身存在着DNA损伤修复的应答机制，会将断裂上下游两端的序列连接起来，从而实现了细胞中目标基因的精确敲除。目的基因待编辑的区域附近存在相对保守的PAM序列（NGG），向导RNA要与PAM上游的序列碱基互补配对(Chakrabarti, Henser-Brownhill et al. 2019)。

使用CRISPR/Cas9构建敲除细胞系，在这类细胞系中，靶标基因可以精确删除，完全去除其编码的蛋白。