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RNA结合蛋白(RBPs)是一类能够与RNA分子特异性结合的蛋白质,通过经典RNA结合域(如RNA识别基序RRM、DEAD-box解旋酶域)或非经典结构域(如固有无序区)识别RNA靶标。人类基因组编码超过2000种RBPs,其功能贯穿RNA的整个生命周期。
RNA结合蛋白可以与circRNA,lncRNA,miRNA非编码RNA结合互作,同时和当下肿瘤免疫,T细胞免疫治疗法,m6A修饰,单细胞测序,可变剪切,CRISPR-Cas9,等很多热点都有密切关系,并有重大发现,很值得我们深入研究。
可以说,没有RBPs,RNA无法发挥任何生理作用。
通过文献检索,数据库分析等方式,确定和疾病研究相关的RBP,根据RBP具体的功能,利用转录组测序技术(RNA-seq),从整体水平研究RBP沉默/过表达对基因表达模式,表达水平,功能通路以及可变剪接事件的影响,提供全面的转录组信息。还可以选择细胞功能实验:细胞增殖、凋亡、侵袭、转移以及和特定疾病相关的功能实验。
iRIP-seq技术可以鉴定与特定RBP直接和间接结合的RNA,获得结合基序,结合强度和结合靶标等信息,可以为沉默/过表达产品的分析结果提供更稳固和更直接的证据,从整体水平研究RBP的功能和作用机制。
英文题目:Insulin-like growth factor 2 mRNA-binding protein 2-regulatedalternative splicing of nuclear factor 1 C-type causes excessive granulosacell proliferation in polycystic ovary syndrome
中文题目:IGF2BP2选择性剪接导致多囊卵巢综合征颗粒细胞过度增殖
期刊:Cell Proliferation
发表时间:2022
目的:多囊卵巢综合征(PCOS)是一种常见的生殖内分泌疾病。胰岛素样生长因子2 mRNA结合蛋白2 (IGF2BP2)作为HMGA2的靶向基因可促进颗粒细胞(GCs)增殖。然而,IGF2BP2是否作为RNA结合蛋白(RBP)参与PCOS的发病机制,目前尚不清楚。在本研究中,作者旨在阐明与IGF2BP2发生相互作用的转录本、全转录组以及GCs中的可变剪接,从而揭示PCOS发病的潜在机制。
材料与方法:采用定量反转录PCR (RT-qPCR)和Western Blot检测PCOS患者GCs中IGF2BP2的表达。通过RNA免疫沉淀测序(RIP-seq)和RNA测序(RNA-seq)捕获了IGF2BP2相互作用的转录本、全转录组以及可变剪接。转染过表达IGF2BP2质粒和核因子1 c型(NFIC) siRNA的KGN细胞,并利用CCK-8、EdU和TUNEL进行检测。
结果:IGF2BP2在PCOS患者GCs中高表达。IGF2BP2作为一个RBP,优先结合mRNA的3’和5’UTR区域,结合基序为:GGAC和新发现的GAAG基序。IGF2BP2的过表达改变了KGN细胞的转录组图谱。IGF2BP2通过抑制NFIC的外显子跳跃事件,调控可变剪接事件,促进细胞增殖。
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