技术简介

Co-IP免疫共沉淀法在体外探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用，是研究蛋白质互作的经典方法。其原理是使用靶蛋白特异性抗体间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白来鉴定目的蛋白高可信度的相互作用蛋白。

技术优势

✔  蛋白可信度高
✔  真实可查

实测数据

案例解析

▶ MACF1通过在细胞质中隔离抑制促进成骨细胞的作用（Cell Death & Differentiation，IF=15.828）

成骨细胞的分化是一个受时空遗传程序调控的动态过程。在此过程中细胞骨架蛋白除了参与细胞骨架的改变，同时也调控多种信号通路，包括Wnt、Hedgehog、MAPK等。

微管微丝交联因子MACF1是一种多结构域的细胞骨架蛋白，广泛参与细胞骨架组装、细胞迁移、增殖和分化等生理过程。

我们的合作客户在《Cell Death & Differentiation》上发表论文“MACF1 promotes osteoblast differentiation by sequestering repressors in cytoplasm”，该研究首次发现细胞骨架蛋白MACF1通过影响成骨分化相关的转录因子在细胞中的定位，影响成骨细胞的分化。我们提供转录组测序技术、CO-IP联合蛋白质谱技术及ChIP-seq技术帮助老师最终锁定了MACF1的互作蛋白及其调控机制

其中，为了进一步研究MACF1的作用，课题组利用了免疫共沉淀结合蛋白质谱分析（Co-IP-MS）检测了敲低MACF1前后，MACF1互作的蛋白。结果显示有5个蛋白在敲低组和对照组细胞中均出现，说明这5个蛋白（ACTB、CDK12、HIST1H4A、MEAF6、VIM）和MACF1存在互作。对敲低组和对照组的互作蛋白进行富集性分析，结果显示对照组互作的蛋白主要富集在filament及细胞外基质通路，而敲低MACF1后基因主要富集在nucleus通路。