技术简介

研究某一基因的功能,比较常用的手段是构建细胞敲低/过表达模型,进而研究其转录组水平变化,研究其调控的基因、通路和表型。常用的敲低/过表达细胞模型构建的方法是:瞬时转染质粒/shRNA/siRNA和慢病毒感染制备稳定细胞模型。但是不同的细胞,需要采用不同的转染条件和手段;关注的不同的基因,选择敲低还是过表达?如何准确的质控,保障后续测序数据和表型实验结果的可靠真实,高质量和可重复?这些将成为准确构建细胞敲低/过表达模型的关键因素。

技术优势

1. 我司具备百余种细胞转染操作及项目经验库,为您心仪的细胞模型量身定做最优转染方案;
2. 严格质控,层层把关,保障后续测序数据和表型实验结果的可靠真实,高质量和可重复性;
3. 数据分析作图和英文材料方法,详细的原始数据,为您发表文章保驾护航;
4. 已发表的文章案例
5. 我司具备百余种细胞培养和转染经验,涵盖各个疾病类型,如下表(包含但不限于此):

服务内容

1)送样要求
2)技术流程
3)服务周期及交付内容

细胞转染/感染

4)结果展示(以人脐静脉内皮细胞HUVEC敲低为例)

· 慢病毒感染

细胞转染/感染

· RNA提取
√ RNA完整性检测——琼脂糖凝胶电泳/RIN/RQN值检测

RNA提取

完整性:RQN/RIN≥7;凝胶电泳三条带清晰,28条带亮度为18s亮度的2倍;

√ RNA定量

定量

A. 纯度:A260/280在1.8-2.2之间;A260/230在1-2之间;
B. 总量和浓度:总量≥2ug,浓度≥100ng/ul。

· RT-qPCR检测

RT-qPCR检测

QPCR结果显示,mRNA水平,敲低70%以上,且T-test具有显著性。

· WB检测

WB结果显示,目的基因蛋白水平,敲低成功,且T-test具有显著性。