技术简介

研究某一基因的功能,比较常用的手段是构建细胞敲低/过表达模型,进而研究其转录组水平变化,研究其调控的基因、通路和表型。常用的敲低/过表达细胞模型构建的方法是:瞬时转染质粒/shRNA/siRNA和慢病毒感染制备稳定细胞模型。

但是不同的细胞,需要采用不同的转染条件和手段;关注的不同的基因,选择敲低还是过表达?如何准确的质控,保障后续测序数据和表型实验结果的可靠真实,高质量和可重复?这些将成为准确构建细胞敲低/过表达模型的关键因素。

技术优势

✔ 我司具备百余种细胞转染操作及项目经验库,为您心仪的细胞模型量身定做最优转染方案;
✔ 严格质控,层层把关,保障后续测序数据和表型实验结果的可靠真实,高质量和可重复性;
✔ 数据分析作图和英文材料方法,详细的原始数据,为您发表文章保驾护航;
✔ 已发表的文章案例
✔ 我司具备百余种细胞培养和转染经验,涵盖各个疾病类型,如右表(包含但不限于此):

技术流程

交付内容:
A. 所有实验结果的原始数据
B. 实验报告(含详细的实验步骤,主要仪器和试剂的厂家货号信息)
C. 英文材料方法

结果展示

以人脐静脉内皮细胞HUVEC敲低为例

慢病毒转染
RNA完整性检测——琼脂糖凝胶电泳/RIN/RQN值检测:RQN/RIN≥7;凝胶电泳三条带清晰,28条带亮度为18s亮度的2倍;
RNA定量: A. 纯度:A260/280在1.8-2.2之间;A260/230在1-2之间; B. 总量和浓度:总量≥2ug,浓度≥100ng/ul。
RT-qPCR检测:QPCR结果显示,mRNA水平,敲低70%以上,且T-test具有显著性。
WB检测:目的基因蛋白水平,敲低成功,且T-test具有显著性